一、质粒如何提取？

实验室用公司试剂盒提取质粒，一般采用的是碱裂解法。比如从大肠杆菌的菌液中提取，基本原理是先加入RNA酶，把RNA去掉，然后用碱裂解菌体，用酸平衡，并且SDS和蛋白质结合形成沉淀，顺便把与蛋白结合的基因组DNA沉淀下来。

最后上清中含有质粒DNA，把它过柱洗脱下来溶到水中就完成了质粒的提取。

二、质粒提取的步骤？

质粒的提取步骤

1. 取通过单克隆过夜培养的新鲜菌1.5-5ml到新EP管，6000-8000rpm离心1-2min，尽量去上清（看菌长的情况怎么样，一般会养多的，所以低速离心，多丢掉点上清乃至混有上清的菌体也没关系，浪费就浪费了）；

2. 取冰盒，放入加了适当浓度的RNase酶的P1 buffer，在收集的菌体沉淀中加入250μl的P1 buffer，并用移液枪打匀（低速其实就是为了方便三下就迅速打匀，高速离心有轻微伤害，且打匀稍微费点劲而已）；

3. 再加入250μl的P2 buffer，温和地上下颠倒5-10次混匀，会有黏液状出现（像果冻一样，注意不要剧烈震荡混匀，有损伤，且可能导致基因组DNA断裂污染质粒，完全可以不静置，裂解时间长了有损伤）；

4. 迅速加入350μl的P3 buffer，再轻柔地上下颠倒5-10次混匀（迅速加P3和速度不要太快的混匀不冲突，剧烈震荡有损伤）；

5. 有白色絮状或块状出现，12000rpm离心5-10min（这里可以高速一下，免得吸取上清把蛋白等吸进去了，所以，吸取干净的上清就行，和之前一样，浪费了一些就浪费了，不要执着全吸走，我们要质量高的质粒，而不是要多的质粒）；

6. 转移全部上清液到吸附柱，4000-6000rpm离心30s-1min，弃废液（这里最好低速离心，充分让吸附柱吸附，所以看吸附柱情况调整转速和时间）；

7. 加入500μl pH=7.5的washing buffer至吸附柱中，4000-6000rpm离心30s-1min，弃废液（同上，低速慢慢洗）；

8. 重复7步骤再洗两次，如果要去除盐类，可以停留1-2min再离心（加洗液）；

9. 空柱12000rpm离心3-5min（这里一定要高速离心，去掉吸附柱里的残留液体，主要是酒精）；

10. 转移吸附柱到1.5ml新EP管，常温或加热开盖放置15-30min，挥发干净剩余酒精（也别太高温或者时间太长，没酒精味道就行）；

11. 轻轻加入65℃，40-50μl左右预热的EB buffer或者ddH2O至吸附柱覆膜中央，静置2min，再12000rpm离心30s-1分钟，留清液（一般，我们用去离子水就好了。免得后续质谱什么还收到残留胍盐影响）；

用Nano drop 2000 测量DNA含量，符合要求则进行下一步的比如电泳验证，酶切等实验。

三、质粒提取的方法？

质粒抽提

质粒抽提方法即去除 RNA，是将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒的方法。

提取质粒DNA的方法有很多种，从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取，从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取，从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等，各种不同的方法各有其优缺点，根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。

四、提取质粒的方法？

质粒抽提

质粒抽提方法即去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。

提取质粒DNA的方法有很多种，从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取，从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取，从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等，各种不同的方法各有其优缺点，根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。

五、质粒提取的原理？

强碱性条件下，质粒DNA和基因组DNA同时从细胞中释放出来，并发生变性。

在pH中性，并有高盐浓度存在的条件下，质粒DNA会迅速发生复性，仍为可溶性状态，染色体DNA之间交联形成不溶性网状结构，在去垢剂SDS作用下，染色体DNA与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉淀，通过离心去除沉淀后，再用酚氯仿抽提进一步纯化质粒DNA，用异丙醇或乙醇沉淀可将之纯化出来。

六、质粒DNA提取时质粒为何会丢失？

首先是你的质粒拷贝数,多的当然好了.低拷贝的可以在收菌前一小时用氯霉素加压筛选下.第二看你是用试剂盒还是手提了,试剂盒的话基本没什么问题,记住几个要点就行.1）溶液2和溶液3加完后混匀要轻柔,越轻越好,否则由基因组污染.2）溶液2和溶液3最好在冰上操作.3）冷结合热洗脱,上柱时温度4度,洗脱时50度-60度.手提的话除了上述几点还要注意RNA的消除,除了LiCl沉淀以外,RNA酶也必不可少,最好37度消1小时以上.别的网上有很多相关的参考,操作时注意些没问题的.

七、为什么提取质粒dna？

质粒多为一些双链、环状的DNA分子，是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作，进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。

在我们的细胞实验中经常会用到质粒DNA，现在都用剂盒非常方便，而且菌体培养后，可以多管浓缩提取，提到的质粒量多，可以-20℃保存，以后用于酶切、转化等实验，可以提前跑个胶，只要不降解，就可以继续用，避免每次要用，都要培养一遍再提取一遍。

八、质粒提取有杂质的原因？

加异丙醇是用来沉淀质粒的，出现白色絮状沉淀，说明质粒提取纯度不够，也就是有蛋白质等污染，蛋白质等杂质和质粒一起沉淀了。

九、怎么对提取质粒进行鉴定？

首先跑一个琼脂糖凝胶电泳，观察一下带型和大小是否符合，然后根据质粒所含有的酶切位点，选择合适的限制性内切酶进行单酶切或双酶切，观察酶切后的条带数和大小是否与理论一致。

十、质粒提取的注意事项？

1、利用氯霉素抑制染色体的复制，而不抑制质粒的复制这一特点，在低拷贝质粒（如pUC19）的培养过程中添加氯霉素可以大大提高得率。

2、RNA 的去除，首先是使用 RNase 消化。在溶液 I 中加入高浓度的 RNase A (100ug/ml)，或者用含 25ug RNase A/ml TE 溶解抽提好的质粒，都可以降低 RNA 残留，但都不能彻底去除。

3、蛋白质的去除，主要是靠不溶解的 K-SDS-蛋白质复合物的形成。虽然将中和后的体系置于 4C 一段时间，可以形成更多的该不溶复合物，从而使蛋白质残留更少，但实践证明这样做并不是必须的，除非是大量抽提。 首先，质粒的提取可分为质粒小提、质粒中提、质粒大提。目前大多数实验室都选用试剂盒进行提取，可以根据实验的不同需求，选择相应的试剂盒。 质粒小提主要用于用于大肠杆菌中质粒DNA的小量提取，获得的质粒可以用于常规的载体构建，一般适用于5ml以下菌液。 而质粒中提，在小提的基础上可以进一步去除菌液中的内毒素，获得的质粒可以用于细胞转染，常规需要菌液量为10-15ml。质粒大提与中提方法相同，可一次抽提100ml-300ml菌液获得大量质粒。

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