小鼠组织的rna怎么提取?
一、小鼠组织的rna怎么提取?
提取小鼠组织中的RNA可以使用以下方法:
1. TRIzol 法:
a. 将收集到的小鼠组织切碎,并加入 TRIzol(一种含有酚和胺的试剂),充分混合。
b. 加入氯仿,并摇匀。
c. 离心样品,使其分成两相(上清液和有机相)。
d. 将上清液转移到新离心管中,并加入异丙醇沉淀 RNA。
e. 离心样品,收集 RNA 沉淀。
f. 使用乙醇洗涤和去除残留的试剂,然后溶解 RNA 沉淀。
2. 纤维素柱法:
a. 将小鼠组织切碎并加入裂解缓冲液。
b. 用离心将细胞碎片和细胞核分离。
c. 加入酚/氯仿提取液,混合并离心。
d. 将上清液转移到新离心管中,加入异丙醇沉淀 RNA。
e. 离心样品,收集 RNA 沉淀。
f. 使用乙醇洗涤和去除残留的试剂,然后溶解 RNA 沉淀。
3. 商用 RNA 提取试剂盒:
可以使用商用的 RNA 提取试剂盒,根据试剂盒提供的操作手册进行操作。常见的商用试剂盒包括Qiagen的RNeasy Mini Kit、Thermo Fisher Scientific的TRIzol Reagent等。
这些方法提供了一些常用的小鼠组织 RNA 提取方法,但具体的选择取决于您的实验目的、设备和实验室条件等因素。在进行实验之前,建议仔细阅读和遵循相关的操作手册,并确保采取适当的实验室安全措施。另外,如果您不具备相关实验技术或经验,建议寻求专业实验室或技术人员的帮助和指导。
二、动物组织提取出的RNA怎么保存?
动物组织提取出的RNA保存方式如下:
取新鲜组织(注:生物体死亡后10分钟内取材料并保存好),组织块以PBS或生理盐水清洗干净,每50~100 mg组织加1 ml Trizol溶液匀浆裂解组织样品,操作最好在冰上进行。
匀浆的裂解液4℃短期保存(1个月),-20度或- 70℃长期保存。
三、如何从组织中提取RNA和DNA?
这个问题应该这样考虑: 根据所得到的组织的量的多少及珍贵程度,看是用kit还是用Trizol来提取。
组织有没有经过处理,比如经过了固定什么的,如果要提取核酸,要用专门的kit来做。还有,根据所提取出来的核酸的用途来看,比如提取的RNA是做qPCR,还是做表达谱芯片的,DNA是做CNV分析的,还是做基因型分析的。在以上各种情况下,才能方便讨论如何提取核酸。四、RNA提取原理?
RNA抽取一般使用Trizol法抽提: Trizol是一种总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速裂解细胞,抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。 Trizol作用原理: 在匀质化或溶解样品中,Trizol试剂可保持RNA的完整性,同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后,裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。 水相转移后,RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后,用乙醇可从中间相沉淀得到DNA,加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。
五、RNA提取问题?
RNA提取步骤及注意事项(仅供参考):实验步骤如下:
1.取50—100mg的组织,加入1mlTrizol试剂,用匀浆器打匀(Trizol先放于冰上)。
2.将匀浆室温放置5min。
3.加入200μl氯仿,剧烈震荡混匀30s,冰上静置3min。
4.12000rpm,4℃离心15min。
5.将上清液小心转移到新的1.5ml离心管中(取400μl),加入等量体积的异丙醇,上下颠倒几次混匀,室温下放置15min。(此步中注意:不要吸取任何中间层物质,宁缺勿烂。)6.12000rpm,4℃离心15min。7.小心移去上清液,防止RNA沉淀丢失。8.用70%乙醇(DEPC处理的水配制)洗涤1次,加入700μl乙醇,将RNA沉淀弹起,漂洗。(此时RNA是不溶解的)9.8000rpm,室温离心10min。10.尽可能彻底地吸走上清,防止RNA沉淀丢失。11.真空离心干燥3—5分钟,或放在室温下使乙醇完全挥发掉。12.沉淀用30μlDEPC-H2O溶解。如发现沉淀难溶,68℃处理10min。13.RNA检测(1)测定样品在260nm和280nm的吸光值按1OD=40μg/mlRNA计算RNA的产量。OD260/OD280在1.8-2.0。(2)进行甲醛变性琼脂糖凝胶电泳,确定RNA的完整性和污染情况。注意事项:1.获得RNA效率低有一下原因a:样品裂解或匀浆处理不彻底b:最后得到地RNA沉淀未完全溶解2.A260/A280<1.65原因a:检测吸光度时,RNA样品不是溶于TE,而是溶于水。低离子浓度和低PH条件下,A280值会较高b:样品匀浆时加地试剂量太少c:匀浆后样品未在室温放置2分钟d:水相中混有有机相e:最后得到地RNA沉淀未完全溶解3.RNA降解原因a:组织取出后没有马上处理或冷冻b:样品或提取地RNA沉淀保存于-5--20度,未在-60--70度保存c:细胞在胰酶处理时被破坏d:溶液或离心管未经RBase去处理
六、rna提取的目的?
真核细胞总RNA分离提取的目的是要获得高纯度的具有充分长度的RNA分子,包括RNA的纯度和完整性。RNA分离的关键是尽量减少RNA酶的污染。RNA酶活性非常稳定,分布广泛,除细胞内源性的RNA酶外,环境中也存在RNA酶。
因此在提取RNA时,应尽量创造一个无RNA酶的环境,包括去除外源性RNA酶的污染和抑制内源性RNA酶活性。
七、RNA提取的意义?
真核细胞总RNA分离提取的目的是要获得高纯度的具有充分长度的RNA分子,包括RNA的纯度和完整性。RNA分离的关键是尽量减少RNA酶的污染。RNA酶活性非常稳定,分布广泛,除细胞内源性的RNA酶外,环境中也存在RNA酶。
因此在提取RNA时,应尽量创造一个无RNA酶的环境,包括去除外源性RNA酶的污染和抑制内源性RNA酶活性。
八、rna柱提取原理?
RNA抽取一般使用Trizol法抽提:
Trizol是一种总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速裂解细胞,抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。
Trizol作用原理:
在匀质化或溶解样品中,Trizol试剂可保持RNA的完整性,同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后,裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。
水相转移后,RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后,用乙醇可从中间相沉淀得到DNA,加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。
九、为什么提取RNA时RNA容易降解?
“提取DNA比提取RNA容易,是因为DNA容易被降解”错误,正确的说法是“提取DNA比提取RNA容易,是因为RNA容易被降解”.因为环境中,充斥着各种RNA酶,很容易把RNA降解掉.在RNA提取实验中,用到的各种试剂和器皿一定要确保除去RNA酶,甚至不能把试剂暴露在空气中.操作不严格的话,可能得到的是RNA降解产物.DNA酶的分布就不如RNA酶,提取DNA时的实验条件相对宽松得多.
十、RNA提取方法有哪些?
RNA提取方法或技术有哪些 通过变性剂破碎细胞或者组织,然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA,再经过沉淀,洗涤,晾干,最后溶解。但是由于RNA酶无处不在,随时可能将RNA降解,所以实验中有很多地方需要注意,稍有疏忽就会前功尽弃。
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