一、trizol法提取总RNA为什么有苯酚杂质？

氯仿是分子量比较大的有机溶剂,在提取RNA时,氯仿可以有效的使有机相和无机相迅速分离.DNA提取过程 有机相中主要是酚和蛋白结合,从而使得蛋白和DNA脱离,DNA进入水相.但是在RNA的提取过程就要避免蛋白和DNA脱离,否则DNA会释放到水相.不管有酚也好,没有酚也好,氯仿本身也对蛋白有变性作用,剧烈的震荡,很容易使得DNA的亲水基团,与水相接触.所以不要剧烈震荡.

异丙醇的作用是通过-OH的疏水作用使得RNA 或者DNA链中的亲水基团受到保护,等同于沉淀,但是这是个反应时发生在水相中,与前面的氯仿不矛盾.

氯仿的作用有多个方面,一是作为有机溶剂变性蛋白,使其沉淀并通过离心除去,同时也通过变性作用抑制RNase活性；二是RNA提取试剂中通常含有苯酚（Trizol主要成分就是苯酚,很多自己配试剂提的方法也用苯酚,抽提蛋白时也会用到苯酚）,苯酚微溶于水,抽提烷之后水相里有痕量的酚,如果不除去会损伤核酸,需要通过氯仿把水相里参与的苯酚抽提掉；三是作为溶剂抽提样品中的一些脂溶性杂质（比如油脂、脂溶性色素等）,起到一定除杂作用

通常氯仿里面会加少量异戊醇（1/25）,减少蛋白质在变性过程中由于震荡产生的泡沫,影响后续操作,不过个人经验感觉加不加没什么太大区别,也许是我的样品里蛋白不多吧

异丙醇是沉淀核酸用的,作用和乙醇一样.只不过用量少一点,0.6V~1V就够了,不像乙醇沉淀需要至少2V,一般需要2.5倍体积.在水相很多,离心管容积有限,加不下太多乙醇的时候一般会用异丙醇沉淀.不过感觉效果不如乙醇,偶尔会有沉淀不出来东西的时候

二、trizol提取rna的步骤及原理？

Trizol是一种常用于细胞和组织RNA提取的试剂，其主要原理是通过三种有机溶剂（酚，异丙醇和氯仿）的混合，能够快速裂解细胞膜和核膜，使细胞释放出RNA、DNA和蛋白质。

其RNA提取步骤主要包括加入Trizol、离心、加入异丙醇、离心、洗涤、脱水和溶解等。

其中，异丙醇可以沉淀RNA，洗涤可以除去杂质，脱水可以加速RNA的沉淀，最终通过溶解得到高质量的RNA样品。

三、用trizol法提取RNA的方法及每一步的原理？

Trizol就是酚氯仿提取法的常用试剂

Trizol中有酚，异硫氰酸胍和B-巯基乙醇。他们的作用都是使蛋白变性，使蛋白质与核酸解聚。加入氯仿，用来分相，实际上是加速有机相和水相的分层，当溶液pH在酸性的时候，DNA分子就会沉淀在酚与溶液的界面，就是白色层，只有RNA分子留在水相，但溶液pH不在酸性范围内，会使DNA溶解在水相，所以使用时按照说明书要求根据细胞数或培养器皿底面积适量加入Trizol。最后异丙醇沉淀，将水相中RNA提取出来。

四、trizon法提取rna原理？

在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可从中间相沉淀得到DNA，加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。

Trizol是一种总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞，抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。RNA的碱基配对规则基本和DNA相同，不过除了A-U、G-C配对外，G-U也可以配对。在细胞中，根据结构功能的不同，RNA主要分三类，即tRNA（转运RNA），rRNA（核糖体RNA）

五、trizol提取RNA时，异丙醇和乙醇的作用是什么？

异丙醇能够使RNA和蛋白质出现沉淀，在trizol提取RNA时，因为前一步已经去除了蛋白质，所以在这里主要作用是沉淀RNA，但是如果前一步蛋白质去除不完全，这一步也会被沉淀的！乙醇的作用主要就是清洗沉淀物中的异丙醇，

六、RNA提取原理？

RNA抽取一般使用Trizol法抽提: Trizol是一种总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞，抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。 Trizol作用原理: 在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。 水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可从中间相沉淀得到DNA，加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。

七、RNA提取问题？

RNA提取步骤及注意事项（仅供参考）：实验步骤如下：

1.取50—100mg的组织,加入1mlTrizol试剂，用匀浆器打匀(Trizol先放于冰上)。

2.将匀浆室温放置5min。

3.加入200μl氯仿,剧烈震荡混匀30s，冰上静置3min。

4.12000rpm，4℃离心15min。

5.将上清液小心转移到新的1.5ml离心管中（取400μl），加入等量体积的异丙醇，上下颠倒几次混匀，室温下放置15min。（此步中注意：不要吸取任何中间层物质，宁缺勿烂。）6.12000rpm，4℃离心15min。7.小心移去上清液，防止RNA沉淀丢失。8.用70%乙醇（DEPC处理的水配制）洗涤1次，加入700μl乙醇，将RNA沉淀弹起，漂洗。（此时RNA是不溶解的）9.8000rpm，室温离心10min。10.尽可能彻底地吸走上清，防止RNA沉淀丢失。11.真空离心干燥3—5分钟，或放在室温下使乙醇完全挥发掉。12.沉淀用30μlDEPC-H2O溶解。如发现沉淀难溶，68℃处理10min。13.RNA检测(1)测定样品在260nm和280nm的吸光值按1OD=40μg/mlRNA计算RNA的产量。OD260/OD280在1.8-2.0。(2)进行甲醛变性琼脂糖凝胶电泳,确定RNA的完整性和污染情况。注意事项：1.获得RNA效率低有一下原因a:样品裂解或匀浆处理不彻底b:最后得到地RNA沉淀未完全溶解2.A260/A280＜1.65原因a:检测吸光度时，RNA样品不是溶于TE，而是溶于水。低离子浓度和低PH条件下，A280值会较高b:样品匀浆时加地试剂量太少c:匀浆后样品未在室温放置2分钟d:水相中混有有机相e:最后得到地RNA沉淀未完全溶解3.RNA降解原因a:组织取出后没有马上处理或冷冻b:样品或提取地RNA沉淀保存于-5--20度，未在-60--70度保存c:细胞在胰酶处理时被破坏d:溶液或离心管未经RBase去处理

八、稀碱法提取RNA的优缺点？

常见的的总RNA提取方法有苯酚法、阴离子去污剂法、LiCl一尿素法、改良的Gomez法、异硫氢酸胍法、CTAB法、热硼酸法及改良热硼酸法、TRIZOL试剂快速提取法。

RNA提取时，就变性剂的选择来说，CTAB（CTAB法）比异硫氰酸胍（RIZOL试剂法）和　SDS（改良热硼酸法）更有效；就CTAB法来说，由于以CTAB为变性剂，同时加入PVP和β一巯基乙醇共同作用变性蛋白、抑制RNase的活性，使用无水乙醇或异丙醇沉淀杂蛋白和总核酸等，然后再选择性地分离出RNA。所以CTAB法是一种很好得总RNA得提取方法。

九、稀碱法提取酵母rna有何优点？

稀碱法提取酵母rna的优点是:

能较好的除去DNA和蛋白质、提取的RNA具有生物活性。

工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均为变性的 RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。浓盐法使用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3-4h，迅速冷却，提取液经离心后, 上清液用乙醇沉淀RNA。稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。酵母含RNA达2.67-10.0%，而DNA含量仅为0.03-0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原料。

十、rna提取的目的？

真核细胞总RNA分离提取的目的是要获得高纯度的具有充分长度的RNA分子，包括RNA的纯度和完整性。RNA分离的关键是尽量减少RNA酶的污染。RNA酶活性非常稳定，分布广泛，除细胞内源性的RNA酶外，环境中也存在RNA酶。

因此在提取RNA时，应尽量创造一个无RNA酶的环境，包括去除外源性RNA酶的污染和抑制内源性RNA酶活性。

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