dna粗提取的原理?
一、dna粗提取的原理?
DNA粗提取的原理是利用DNA和RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异,分离出DNA。DNA是一种重要的遗传物质,在细胞中含量丰富,但它在细胞中的分布不均,所以需要从细胞中提取出来,以便进行相关实验。
在DNA粗提取过程中,需要选择适当的材料,并进行预处理,以保证后续提取过程的顺利进行。常用的材料包括动物细胞、植物细胞、细菌、病毒等。
在提取过程中,需要利用洗涤剂、酸碱剂、醇类溶剂等化学试剂来破坏细胞壁和细胞膜,去除蛋白质和脂质等杂质,最终得到含有DNA的溶液。
常用的提取方法包括酚氯仿提取法、离子交换柱提取法、硅胶柱提取法等。这些方法可以根据实验需求进行选择和调整,以达到最佳的提取效果。
二、dna粗提取的实验目的?
目的主要是证明DNA是主要的遗传物质。那么DNA是什么样的物质呢?
通过试验,我们知道选用鸡血细胞液作为实验材料。在制备鸡血细胞液时,所用的柠檬酸钠有防止血液凝固的作用。制备过程中,一定要用刚宰杀的鸡的新鲜血,并且要与抗凝剂充分混合,防止凝血。采用静置一天的方法,获得鸡血细胞液。在动手做实验之前先要明确几个需要注意的问题。
1、要严格按照实验指导的方法步骤去操作。
2、实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌,使用时玻璃棒不要碰到烧杯底,在不同的步骤中玻璃棒的用法不同,每一步的用法参照黑板上的指导去操作。
3、在DNA的鉴定中,所用的二苯胺是一种有毒性的试剂,大家在使用时注意不要让药液接触到皮肤或身体的其他部位,也不要近距离观察。
下面在实验进行过程中,要思考每一操作步骤要达到什么目的。
在进行步骤1时,利用搅拌的5分钟,做如下提问:
为什么要加蒸馏水?加入蒸馏水后细胞将会怎样?
(让细胞内溶液的浓度大于周围溶液的浓度,细胞会吸水以至胀破)
为什么要用力搅拌?
(可以加速血细胞和细胞核的破裂)
所以下一步骤过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质。
在进行步骤3时,要向全班明确:这一步骤是这个实验成败的关键,注意加蒸馏水的方法和使用玻璃棒的方法,千万不能太快太猛,防止打碎DNA。观察滤取出来的黏稠物的颜色。提取的黏稠物较少,原因可能是在溶解DNA时不充分,也可能是析出黏稠物时搅拌的快了。
三、如何提取DNA粗提和精提的方法?
一、DNA提取(粗提取)
1、酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb
2、甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA可得DNA200kb左右。
3、玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解物铺于乙醇上,然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅,DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。
4、异丙醇沉淀法:基本同1法,仅用二倍容积异丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在异丙醇中可溶状态)
5、表面活性剂快速制备法:用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。
6、加热法快速制备:加热96℃-100℃,五分钟,然后离心后取上清,可用于PCR反应。
7、碱变性快速制备:先用NaOH作用20分钟,再加HCI中和,离心后取上清,含少量DNA。
二、DNA的浓缩(精提取)
1、固体聚乙二醇(PEG)浓缩:用透析袋外敷PEG至合适量。
2、丁醇抽提浓缩:DNA溶液中水可分配到正丁醇或仲丁醇,但DNA不会。因此重复几次可显著减少DNA体积。
3、乙醇或异丙醇沉淀:(1)需要阳离子盐的存在,NaAc最常用,NaCl对含SDS样品好,NH4Ac去除dNTP好。PiCl沉淀RNA好,但不能用于反转录前。(2)沉淀温度与时间;0℃一4℃,12000g,10分钟,小于100bp DNA需超速离心。
4、精胺沉淀法:与DNA结合后使DNA结构凝缩沉淀,需在无盐或低盐溶液。
四、dna的粗提取与鉴定需要配制什么试剂?
高中教材,粗提取:2M的NaCl溶液,95%酒精 从动物细胞中提取鉴定:二苯胺试剂(如下)A液:1.5g二苯胺溶于100ml冰醋酸中,再加1.5ml浓硫酸,用棕色瓶保存.如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化再使用.B液:乙醛的体积分数为0.2%的溶液配制:0.1ml B液加入到10ml A液中,现配现用.
五、DNA提取方法?
DNA的提取方法
一.酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb
二.甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA可得DNA200kb左右。
三.玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解物铺于乙醇上,然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅,DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。
四.异丙醇沉淀法:基本同1法,仅用二倍容积异丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在异丙醇中可溶状态)
五.表面活性剂快速制备法:用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。
六.加热法快速制备:加热96℃-100℃,五分钟,然后离心后取上清,可用于PCR反应。
七.碱变性快速制备:先用NaOH作用20分钟,再加HCI中和,离心后取上清,含少量DNA。
六、DNA怎么提取?
DNA提取的几种方法
(1).浓盐法
利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同,将二者分离,常用的方法是用1M 氯 纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的 氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.
两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.
以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.
(2).阴离子去污剂法:
用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA.
(3).苯酚抽提法:
苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并含DNA 的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀DNA 。此时DNA是十分粘稠的物质,可用玻璃漫漫绕成一团,取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态 .
( 4).水抽提法:
利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA,然后将沉淀溶于水中,使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ٠80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.
七、怎样提取DNA?
DNA提取是从细胞中分离和纯化DNA的过程。下面是一种常见的基本方法。
实验步骤:
1. 从含有DNA的样本(比如血液、细菌、植物等)中采集细胞并将其释放到一个离心管中。
2. 加入细胞裂解液,用来破坏细胞壁和细胞膜,释放出细胞内的DNA。
3. 加入蛋白酶,将细胞内的蛋白质降解掉。通常使用丝氨酸蛋白酶或蛋白酶K。
4. 加入盐,使得DNA与其他细胞成分分离。盐可以使DNA形成一个粘稠的团块,从而方便分离和纯化。
5. 加入冷酒精,使得DNA在酒精中沉淀并凝聚成片。通常使用70%的乙醇或异丙醇。
6. 使用微量孔径滤器或离心机进行分离和纯化,去除其它杂质,使DNA得以分离和纯化。
注意事项:
1. 在实验中使用的工具和材料要彻底消毒,以避免细菌和其他污染物的干扰。
2. 在实验过程中要保持样品温度低,以防止DNA分解。
3. 在实验过程中,不能使用过多的酒精或其他重质组分,否则DNA可能会被破坏。
八、dna粗提取中研磨液主要成分是什么?
DNA粗提取中研磨液的主要成分是研磨珠和溶液缓冲剂。研磨珠通常使用玻璃或金属材料制成,其大小和形状因制备不同而有所区别。溶液缓冲剂则包括高浓度盐溶液、缓冲液(例如Tris-HCl)、表面活性剂(例如Tween-20)以及融解剂(例如EDTA等)。这些成分可以协同作用,使样品细胞膜和核膜被有效地破坏,让细胞内的DNA得到释放并能够被提取出来。
需要注意的是,不同实验室可能会采用不完全相同的DNA提取方法和试剂盒,其组成和配比可能略有差异。因此,在进行实验前最好查阅具体方法并按要求准备试剂。
九、dna的提取方法?
DNA的提取方法有7种:酚抽提法、甲酰胺解聚法、玻璃棒缠绕法、异丙醇沉淀法、表面活性剂快速制备法、加热法快速制备、碱变性快速制备。
DNA的提取原则
1、保证核酸一级结构的完整性;
2、核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子;
3、其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度;
4、其他核酸分子,如RNA,也应尽量去除。
十、提取dna的材料?
原则上来说,凡是含有DNA的生物 材料都可以考虑。哺乳动物的血液不能 够作为提取DNA的材料,因为哺乳动物 的成熟的红细胞没有细胞核,不含有 DNA。我们在实验中,一般要选用DNA 含量相对较高的生物组织,这样成功的 可能性更大。例如,鸡血就常用作提取 DNA的材料,因为鸡血细胞核DNA含 量丰富而且容易得到
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