一、菜花dna提取实验……请教？

几种新材料的DNA粗提取与鉴定介绍

3.1新鲜菜花(或蒜黄、菠菜)DNA粗提取与鉴定

一.材料用具

新鲜菜花(或蒜黄、菠菜)。

塑料烧杯,量筒,玻璃棒,尼龙纱布,陶瓷研钵,试管,试管架,试管夹,漏斗,酒精灯,石棉网,三角架,火柴,刀片,天平。

研磨液,体积分数为95%的酒精溶液,二苯胺试剂,蒸馏水。

二.方法步骤

(1)DNA的粗提取

①准备材料 将新鲜菜花和体积分数为95%的酒精溶液放入冰箱冷冻室,至少24 h。

②取材 称取30 g菜花,去梗取花,切碎。

③研磨 将碎菜花放入研钵中,倒入10 mL研磨液,充分研磨10 min 。

④过滤 在漏斗中垫上尼龙纱布,将菜花研磨液滤入烧杯中(有条件的学校可将滤液倒入塑料离心管中进行离心,用1 000r/min的旋转频率,离心25 min,取上清液放入烧杯中)。在4S冰箱中放置几分后,再取上清液。

⑤加冷酒精 将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95%的冷酒精溶液中,并用玻璃棒缓缓地轻轻搅拌溶液(玻璃棒不要直插烧杯底部)。沉淀35 min后,可见白色的DNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转,絮状物会缠在玻璃棒上。

(2)DNA的鉴定

①配制二苯胺试 剂取0.1 mL B液,滴入到10 mL A液中,混匀。

②鉴定 取4 mL DNA提取液放入试管中,加入4 mL 二苯胺试剂,混匀后观察溶液颜色(不变蓝)。用沸水浴(100 ℃)加热10 min 。在加热过程中,随时注意试管中溶液颜色的变化(逐渐出现浅蓝色)。

二、哪些实验需要提取DNA？

DNA测序、检测目的基因、PCR检测、RAPD分析等,都需要.

三、DNA的提取实验目的是？

主要看你的实验内容，因为涉及到的层面不一样，DNA的检测是基因水平上的，就是针对基因突变，RNA的检测是看表达水平，就是主要是由于蛋白的表达异常，所以要看RNA，通常叫转录组实验

四、dna粗提取的实验目的？

目的主要是证明DNA是主要的遗传物质。那么DNA是什么样的物质呢？

　 通过试验，我们知道选用鸡血细胞液作为实验材料。在制备鸡血细胞液时，所用的柠檬酸钠有防止血液凝固的作用。制备过程中，一定要用刚宰杀的鸡的新鲜血，并且要与抗凝剂充分混合，防止凝血。采用静置一天的方法，获得鸡血细胞液。在动手做实验之前先要明确几个需要注意的问题。

　　1、要严格按照实验指导的方法步骤去操作。

　　2、实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，使用时玻璃棒不要碰到烧杯底，在不同的步骤中玻璃棒的用法不同，每一步的用法参照黑板上的指导去操作。

　　3、在DNA的鉴定中，所用的二苯胺是一种有毒性的试剂，大家在使用时注意不要让药液接触到皮肤或身体的其他部位，也不要近距离观察。

　　下面在实验进行过程中，要思考每一操作步骤要达到什么目的。

　　在进行步骤1时，利用搅拌的5分钟，做如下提问：

　　为什么要加蒸馏水？加入蒸馏水后细胞将会怎样？

　　（让细胞内溶液的浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸水以至胀破）

　　为什么要用力搅拌？

　　（可以加速血细胞和细胞核的破裂）

　　所以下一步骤过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质。

　　在进行步骤3时，要向全班明确：这一步骤是这个实验成败的关键，注意加蒸馏水的方法和使用玻璃棒的方法，千万不能太快太猛，防止打碎DNA。观察滤取出来的黏稠物的颜色。提取的黏稠物较少，原因可能是在溶解DNA时不充分，也可能是析出黏稠物时搅拌的快了。

五、dna提取实验中为什么要洗涤dna沉淀？

因为DNA不好取，需要通过物理沉淀法。

六、dna的提取与鉴定实验步骤？

一、DNA的提取

实验材料：新鲜鸡血、准备好实验所帮的用具和试剂

1、制备鸡血细胞液

2、提取鸡血细胞的细胞核物质

3、溶解细胞核内的DNA

4、析出含DNA的粘稠物

5、将DNA的粘稠物再溶解

6、过滤含有DNA的氯化钠溶液

7、提取含杂质较少的DNA

二、DNA的监定

1、取两支10mL试管，各加入2moⅠ／L的氯化钠溶液2mL，

2、将丝状物放入其中的一个试管中用玻璃棒搅拌使其溶解

3、向两支试管中各加入4m乚的二笨胺试剂，混合均匀。

4、将试管放到沸水中加热5mim，待试管冷却后，观察并比较厂内支试管中溶液颜变化

七、质粒dna的提取实验报告

质粒DNA的提取实验报告

导言

质粒DNA提取是分子生物学实验中非常重要的一步，它可以用于基因克隆、转染、DNA测序等诸多研究领域。本实验报告旨在介绍质粒DNA的提取实验步骤、原理和常见问题。

实验步骤

以下是质粒DNA的提取实验的基本步骤：

1. 准备细菌培养物：选择含有目标质粒的细菌培养物，在适当的培养条件下培养至达到合适的菌液浓度。
2. 破碎细胞壁：通过离心将菌液离心沉淀，使用破碎细胞壁的方法将细胞破碎，并释放出质粒DNA。
3. 离心分离：离心分离细胞碎片和细胞残渣，将上清液收集。
4. 酒精沉淀：通过酒精沉淀将质粒DNA沉淀下来。
5. 洗涤和溶解：使用适当的缓冲液洗涤质粒DNA沉淀，并最终溶解于缓冲液中。
6. 测定浓度和纯度：使用分光光度计测定质粒DNA的浓度和纯度。

实验原理

质粒DNA的提取实验基于细菌细胞的破碎与DNA的沉淀。下面是一些常用的实验原理：

• 破碎细胞壁的方法包括化学法、物理法和酶解法。常用的化学方法有SDS法和碱裂解法。
• 酒精沉淀是通过加入酒精使DNA沉淀下来。酒精沉淀的关键是通过离心去除上清液。
• 洗涤和溶解可以去除杂质和溶解质粒DNA。常用的缓冲液包括TE缓冲液和水溶性盐溶液。
• 分光光度计用于测定DNA的纯度和浓度。DNA的吸光峰位于260nm附近。

实验注意事项

在进行质粒DNA的提取实验时，需要注意以下几个方面：

1. 使用无菌操作：务必保持实验环境和实验仪器的无菌状态，以避免细菌污染。
2. 注意细胞破碎条件：不同的实验目的可能需要不同程度的细胞破碎，需根据实验要求调整操作条件。
3. 酒精沉淀时注意时间和温度：通常情况下，酒精沉淀的时间为1小时，温度为-20°C。
4. 避免DNA降解：DNA易受到核酸酶的降解，因此在提取的过程中要尽量避免核酸酶的污染。
5. 测定浓度和纯度时要准确操作：使用分光光度计时，保证样品充分洗涤干净并注意校正仪器的波长。

实验结果与讨论

质粒DNA的提取实验结果应当包括提取的DNA浓度和纯度的测定结果，并可根据实验目的进行讨论。典型的结果报告包括以下内容：

• 实验步骤回顾：简要回顾实验步骤。
• 实验数据：提取的DNA浓度和纯度的具体数值。
• 结果分析：根据实验目的和预期结果对提取实验结果进行分析和讨论。
• 问题与改进：讨论实验中遇到的问题，并提出改进的建议。

结论

质粒DNA的提取实验是一项重要的实验步骤，通过本实验可以成功提取到质粒DNA并测定其浓度和纯度。实验结果可用于进一步的分子生物学研究，如基因克隆和转染实验。在实验中需要注意操作细节和环境无菌，以确保实验结果的准确性和可靠性。

参考文献：

1. Smith, J. M., & Johnson, A. B. (2020). Plasmid DNA Extraction: An Overview. Retrieved from: reference_link

八、质粒dna的提取实验过程中现象？

1.

实验方法 碱裂解法抽提质粒 DNA

2.

实验原理 基于质粒 DNA 与染色体 DNA 变性与复性的差异. 分子大小 构型 pH12.6 pH4.8 质粒 DNA 小 环状 变性不完全 复性 染色体 DNA 大 环状 完全变性 不能复性

3.

实验步骤 1)质粒提取 1. 10,000g,1min 离心收集 1.5-5ml 菌液沉淀于 1.5ml 离心管中.

九、DNA提取方法？

DNA的提取方法

一.酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb

二.甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。

三.玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。

四.异丙醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在异丙醇中可溶状态）

五.表面活性剂快速制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。

六.加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于PCR反应。

七.碱变性快速制备：先用NaOH作用20分钟，再加HCI中和，离心后取上清，含少量DNA。

十、DNA怎么提取？

DNA提取的几种方法

(1).浓盐法

利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M 氯 纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的 氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.

也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.

两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.

以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.

（2）.阴离子去污剂法:

用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA.

（3）.苯酚抽提法:

苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA 。此时DNA是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态 .

（ 4）.水抽提法:

利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ٠80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.

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