DNA提取方法？

2023-11-03 04:19

一、DNA提取方法？

DNA的提取方法

一.酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb

二.甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。

三.玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。

四.异丙醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在异丙醇中可溶状态）

五.表面活性剂快速制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。

六.加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于PCR反应。

七.碱变性快速制备：先用NaOH作用20分钟，再加HCI中和，离心后取上清，含少量DNA。

二、DNA怎么提取？

DNA提取的几种方法

(1).浓盐法

利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M 氯纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.

也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.

两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.

以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.

（2）.阴离子去污剂法:

用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA.

（3）.苯酚抽提法:

苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA 。此时DNA是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态 .

（ 4）.水抽提法:

利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ٠80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.

三、怎样提取DNA？

DNA提取是从细胞中分离和纯化DNA的过程。下面是一种常见的基本方法。

实验步骤：

1. 从含有DNA的样本（比如血液、细菌、植物等）中采集细胞并将其释放到一个离心管中。

2. 加入细胞裂解液，用来破坏细胞壁和细胞膜，释放出细胞内的DNA。

3. 加入蛋白酶，将细胞内的蛋白质降解掉。通常使用丝氨酸蛋白酶或蛋白酶K。

4. 加入盐，使得DNA与其他细胞成分分离。盐可以使DNA形成一个粘稠的团块，从而方便分离和纯化。

5. 加入冷酒精，使得DNA在酒精中沉淀并凝聚成片。通常使用70%的乙醇或异丙醇。

6. 使用微量孔径滤器或离心机进行分离和纯化，去除其它杂质，使DNA得以分离和纯化。

注意事项：

1. 在实验中使用的工具和材料要彻底消毒，以避免细菌和其他污染物的干扰。

2. 在实验过程中要保持样品温度低，以防止DNA分解。

3. 在实验过程中，不能使用过多的酒精或其他重质组分，否则DNA可能会被破坏。

四、什么app可以提取文案？

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五、dna的提取方法？

DNA的提取方法有7种：酚抽提法、甲酰胺解聚法、玻璃棒缠绕法、异丙醇沉淀法、表面活性剂快速制备法、加热法快速制备、碱变性快速制备。

DNA的提取原则

1、保证核酸一级结构的完整性；

2、核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；

3、其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度；

4、其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除。

六、提取dna的材料？

原则上来说，凡是含有DNA的生物材料都可以考虑。哺乳动物的血液不能够作为提取DNA的材料，因为哺乳动物的成熟的红细胞没有细胞核，不含有 DNA。我们在实验中，一般要选用DNA 含量相对较高的生物组织，这样成功的可能性更大。例如，鸡血就常用作提取 DNA的材料，因为鸡血细胞核DNA含量丰富而且容易得到

七、病毒DNA提取技巧？

以下是从动物病毒中快速提取DNA的方法，请参考该方案采用离心操作，适合于从动物组织样品中快速提取病毒基因组DNA。以下步骤都在室温下进行。

1．取50-100mg的动物组织加入约3倍体积的生理盐水进行匀浆，充分匀浆后10,000rpm离心2min去除残余组织。

2．取150μl上清液至新的洁净离心管中。

3．加入500μlDNA提取液至上清液中，颠倒混匀，室温静置5-10min裂解病毒。

4．把DNA吸附柱装在2ml收集管中，把裂解后的液体全部转移至DNA吸附柱中，10,000rpm离心1min。

5．倒弃滤液，把DNA吸附柱装回收集管中，加入400μl洗涤液至DNA吸附柱中，10,000rpm离心1min。注：洗涤液初次使用前请先加入48ml无水乙醇。使用完立即盖上盖，以防乙醇挥发。

6．重复步骤5。

7．倒弃收集管中的滤液，把DNA吸附柱装回收集管中，10,000rpm离心3min。

8．把DNA吸附柱装在新的洁净离心管中，加入30-50μl洗脱液至吸附柱中央，静置1-2min，10,000rpm离心1min，所得即为DNA溶液，可用于后续实验，若暂时不用，应于-20℃可储存。

八、植物DNA提取原理？

植物DNA的提取

1、目的要求

学习从新鲜的叶片中提取植物总DNA的方法。

2、实验原理

本实验介绍的就是一种快速简便提取植物总DNA的方法：先将新鲜的叶片在液氨中研磨，以机械力破碎细胞壁，然后加入十六烷三甲基溴化铵（简称CBA,是一种阳离子去污剂)分离缓冲液，使细胞膜破裂，同时将核酸与植物多糖等杂质分开。再经氯仿-异戊醇提取去除蛋白，即可得到适合于酶切的DNA。

3、试剂和器材

一、试剂

CTBA抽提缓冲液：2%CTBA.100mmolL Tris-HCl,pH8.0;20mmolL EDTA;1.4molL

NaCl;0.2%(vv)巯基乙醇共100mL:称取2 g CTBA,8.18 g NaCI,0.74 g EDTA Na22H20,加入10mL1molL的Tris-HCl,pH8.0,0.2mL的巯基乙醇，加水定容至100mL.

TE:TrisEDTA缓冲液：10mmolL Tris-HCl,pH8.0;1mmolL EDTA。

异丙醇：乙醇：氯仿一异戊醇(24：1，V:V):液氮。

二、材料

新鲜植物叶片。

三、材

研钵：离心机：恒温水浴。

4、操作方法

1.称取lg新鲜叶片，置于预冷的研钵中，倒入液氮，将叶片研至粉末。

2.将叶片粉末转入一个30mL离心管中。

3。加10 mL CTBA抽提缓冲液，轻轻转动离心管使之混匀。于65℃温育10min。加入等体积的氯仿一异戊醇，轻轻颠倒混匀。

4.室温下4000rmin离心10min,回收上层水相。在回收的上层水相中。

5。加入23体积预冷的异丙醇（预冷至一20℃），轻轻混匀，置冰箱中放置数小时梦至过夜，使核酸沉淀下来。

6.室温下4000rmin离心10min。

7.小心倒去上清液，用80%乙醇洗涤沉淀物.尽量沥干乙醇，置于真空干燥器内干称重，计算产率。

8.将DNA沉淀溶于1mLTE中。

九、质粒DNA提取和细胞基因组DNA提取的异同？

质粒小，复性容易，而染色体DNA大，不易复性；这导致两种DNA提取采用完全不同的策略。

质粒dna提取，为了区分于DNA，都采用首先从混合物中分离出来，然后逐步纯化；而染色体DNA提取的策略则为逐步去除其他杂质，最后剩下的就是DNA了。质粒DNA提取方法有几种，最常见的碱裂解法利用碱变形（加溶液II）后用醋酸溶液快速复性（溶液III），这样使得质粒DNA可以复性而溶解，而GenomeDNA不能复性而沉淀，从而将他们分开。

而后面的纯化如除蛋白（酚、氯仿），除盐（75%酒精），沉淀（酒精、异丙醇等）两者类似。当然两者都有很粗略的简易提法，那就完全大相径庭啦。