dna的提取方法?
一、dna的提取方法?
DNA的提取方法有7种:酚抽提法、甲酰胺解聚法、玻璃棒缠绕法、异丙醇沉淀法、表面活性剂快速制备法、加热法快速制备、碱变性快速制备。
DNA的提取原则
1、保证核酸一级结构的完整性;
2、核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子;
3、其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度;
4、其他核酸分子,如RNA,也应尽量去除。
二、提取dna的材料?
原则上来说,凡是含有DNA的生物 材料都可以考虑。哺乳动物的血液不能 够作为提取DNA的材料,因为哺乳动物 的成熟的红细胞没有细胞核,不含有 DNA。我们在实验中,一般要选用DNA 含量相对较高的生物组织,这样成功的 可能性更大。例如,鸡血就常用作提取 DNA的材料,因为鸡血细胞核DNA含 量丰富而且容易得到
三、DNA提取方法?
DNA的提取方法
一.酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb
二.甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA可得DNA200kb左右。
三.玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解物铺于乙醇上,然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅,DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。
四.异丙醇沉淀法:基本同1法,仅用二倍容积异丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在异丙醇中可溶状态)
五.表面活性剂快速制备法:用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。
六.加热法快速制备:加热96℃-100℃,五分钟,然后离心后取上清,可用于PCR反应。
七.碱变性快速制备:先用NaOH作用20分钟,再加HCI中和,离心后取上清,含少量DNA。
四、DNA怎么提取?
DNA提取的几种方法
(1).浓盐法
利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同,将二者分离,常用的方法是用1M 氯 纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的 氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.
两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.
以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.
(2).阴离子去污剂法:
用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA.
(3).苯酚抽提法:
苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并含DNA 的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀DNA 。此时DNA是十分粘稠的物质,可用玻璃漫漫绕成一团,取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态 .
( 4).水抽提法:
利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA,然后将沉淀溶于水中,使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ٠80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.
五、怎样提取DNA?
DNA提取是从细胞中分离和纯化DNA的过程。下面是一种常见的基本方法。
实验步骤:
1. 从含有DNA的样本(比如血液、细菌、植物等)中采集细胞并将其释放到一个离心管中。
2. 加入细胞裂解液,用来破坏细胞壁和细胞膜,释放出细胞内的DNA。
3. 加入蛋白酶,将细胞内的蛋白质降解掉。通常使用丝氨酸蛋白酶或蛋白酶K。
4. 加入盐,使得DNA与其他细胞成分分离。盐可以使DNA形成一个粘稠的团块,从而方便分离和纯化。
5. 加入冷酒精,使得DNA在酒精中沉淀并凝聚成片。通常使用70%的乙醇或异丙醇。
6. 使用微量孔径滤器或离心机进行分离和纯化,去除其它杂质,使DNA得以分离和纯化。
注意事项:
1. 在实验中使用的工具和材料要彻底消毒,以避免细菌和其他污染物的干扰。
2. 在实验过程中要保持样品温度低,以防止DNA分解。
3. 在实验过程中,不能使用过多的酒精或其他重质组分,否则DNA可能会被破坏。
六、DNA复制的概念?
从亲代DNA合成子代DNA的过程。根据沃森-克里克提出的DNA双螺旋模型和DNA的复制机制:亲代DNA的两条链解开,每条链作为新链的模板,从而形成两个子代DNA分子,其中每一个子代DNA分子包含一条亲代链和一条新合成的链。
以亲代DNA分子为模板,经多种酶的作用,合成一个具有相同序列的新的子代DNA分子的过程。使模板包含的遗传信息被复制。 DNA复制是指DNA双链在细胞分裂以前进行的复制过程,复制的结果是一条双链变成两条一样的双链(如果复制过程正常的话),每条双链都与原来的双链一样。
这个过程是通过名为半保留复制的机制来得以顺利完成的。
七、dna复制概念?
dna复制是指dna双链在细胞分裂以前的分裂间期进行的复制过程,复制的结果是一条双链变成两条一样的双链,每条双链都与原来的双链一样。这个过程通过边解旋边复制和半保留复制机制得以顺利完成。dna复制主要包括引发、延伸、终止三个阶段。
八、质粒DNA提取和细胞基因组DNA提取的异同?
质粒小,复性容易, 而染色体DNA大 ,不易复性;这导致两种DNA提取采用完全不同的策略。
质粒dna提取,为了区分于DNA,都采用首先从混合物中分离出来,然后逐步纯化;而染色体DNA提取的策略则为逐步去除其他杂质,最后剩下的就是DNA了。质粒DNA提取方法有几种,最常见的碱裂解法利用碱变形(加溶液II)后用醋酸溶液快速复性(溶液III),这样使得质粒DNA可以复性而溶解,而GenomeDNA不能复性而沉淀,从而将他们分开。
而后面的纯化如除蛋白(酚 、氯仿),除盐(75%酒精),沉淀(酒精、异丙醇等)两者类似。当然两者都有很粗略的简易提法,那就完全大相径庭啦。
九、提取DNA的方法总结?
提取生物大分子的基本思路是选用 一定的物理或化学方法分离具有不同物 理或化学性质的生物大分子。
对于 DNA的粗提取而言,就是要利用DNA 与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学 性质方面的差异,去除其他部分,提取出 DNA。
此外,还可以利用DNA和蛋白 质带电性质的差异以及分子本身的大 小1形状的不同,使两者在同一电场下迁 移速度不同,从而实现样品中DNA与蛋 白质的分离
十、dna粗提取的原理?
DNA粗提取的原理是利用DNA和RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异,分离出DNA。DNA是一种重要的遗传物质,在细胞中含量丰富,但它在细胞中的分布不均,所以需要从细胞中提取出来,以便进行相关实验。
在DNA粗提取过程中,需要选择适当的材料,并进行预处理,以保证后续提取过程的顺利进行。常用的材料包括动物细胞、植物细胞、细菌、病毒等。
在提取过程中,需要利用洗涤剂、酸碱剂、醇类溶剂等化学试剂来破坏细胞壁和细胞膜,去除蛋白质和脂质等杂质,最终得到含有DNA的溶液。
常用的提取方法包括酚氯仿提取法、离子交换柱提取法、硅胶柱提取法等。这些方法可以根据实验需求进行选择和调整,以达到最佳的提取效果。
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