质粒如何提取?
一、质粒如何提取?
实验室用公司试剂盒提取质粒,一般采用的是碱裂解法。比如从大肠杆菌的菌液中提取,基本原理是先加入RNA酶,把RNA去掉,然后用碱裂解菌体,用酸平衡,并且SDS和蛋白质结合形成沉淀,顺便把与蛋白结合的基因组DNA沉淀下来。
最后上清中含有质粒DNA,把它过柱洗脱下来溶到水中就完成了质粒的提取。
二、质粒提取的步骤?
质粒的提取步骤
1. 取通过单克隆过夜培养的新鲜菌1.5-5ml到新EP管,6000-8000rpm离心1-2min,尽量去上清(看菌长的情况怎么样,一般会养多的,所以低速离心,多丢掉点上清乃至混有上清的菌体也没关系,浪费就浪费了);
2. 取冰盒,放入加了适当浓度的RNase酶的P1 buffer,在收集的菌体沉淀中加入250μl的P1 buffer,并用移液枪打匀(低速其实就是为了方便三下就迅速打匀,高速离心有轻微伤害,且打匀稍微费点劲而已);
3. 再加入250μl的P2 buffer,温和地上下颠倒5-10次混匀,会有黏液状出现(像果冻一样,注意不要剧烈震荡混匀,有损伤,且可能导致基因组DNA断裂污染质粒,完全可以不静置,裂解时间长了有损伤);
4. 迅速加入350μl的P3 buffer,再轻柔地上下颠倒5-10次混匀(迅速加P3和速度不要太快的混匀不冲突,剧烈震荡有损伤);
5. 有白色絮状或块状出现,12000rpm离心5-10min(这里可以高速一下,免得吸取上清把蛋白等吸进去了,所以,吸取干净的上清就行,和之前一样,浪费了一些就浪费了,不要执着全吸走,我们要质量高的质粒,而不是要多的质粒);
6. 转移全部上清液到吸附柱,4000-6000rpm离心30s-1min,弃废液(这里最好低速离心,充分让吸附柱吸附,所以看吸附柱情况调整转速和时间);
7. 加入500μl pH=7.5的washing buffer至吸附柱中,4000-6000rpm离心30s-1min,弃废液(同上,低速慢慢洗);
8. 重复7步骤再洗两次,如果要去除盐类,可以停留1-2min再离心(加洗液);
9. 空柱12000rpm离心3-5min(这里一定要高速离心,去掉吸附柱里的残留液体,主要是酒精);
10. 转移吸附柱到1.5ml新EP管,常温或加热开盖放置15-30min,挥发干净剩余酒精(也别太高温或者时间太长,没酒精味道就行);
11. 轻轻加入65℃,40-50μl左右预热的EB buffer或者ddH2O至吸附柱覆膜中央,静置2min,再12000rpm离心30s-1分钟,留清液(一般,我们用去离子水就好了。免得后续质谱什么还收到残留胍盐影响);
用Nano drop 2000 测量DNA含量,符合要求则进行下一步的比如电泳验证,酶切等实验。
三、质粒提取的原理?
强碱性条件下,质粒DNA和基因组DNA同时从细胞中释放出来,并发生变性。
在pH中性,并有高盐浓度存在的条件下,质粒DNA会迅速发生复性,仍为可溶性状态,染色体DNA之间交联形成不溶性网状结构,在去垢剂SDS作用下,染色体DNA与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉淀,通过离心去除沉淀后,再用酚氯仿抽提进一步纯化质粒DNA,用异丙醇或乙醇沉淀可将之纯化出来。
四、提取质粒的方法?
质粒抽提
质粒抽提方法即去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒。
提取质粒DNA的方法有很多种,从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取,从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取,从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等,各种不同的方法各有其优缺点,根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。
五、质粒提取的方法?
质粒抽提
质粒抽提方法即去除 RNA,是将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒的方法。
提取质粒DNA的方法有很多种,从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取,从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取,从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等,各种不同的方法各有其优缺点,根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。
六、质粒DNA提取时质粒为何会丢失?
首先是你的质粒拷贝数,多的当然好了.低拷贝的可以在收菌前一小时用氯霉素加压筛选下.第二看你是用试剂盒还是手提了,试剂盒的话基本没什么问题,记住几个要点就行.1)溶液2和溶液3加完后混匀要轻柔,越轻越好,否则由基因组污染.2)溶液2和溶液3最好在冰上操作.3)冷结合热洗脱,上柱时温度4度,洗脱时50度-60度.手提的话除了上述几点还要注意RNA的消除,除了LiCl沉淀以外,RNA酶也必不可少,最好37度消1小时以上.别的网上有很多相关的参考,操作时注意些没问题的.
七、本地视频文案提取?
合理使用工具可以大大提高我们的工作效率。微信小程序“视频转文案神器”在视频到文本的转换中有非常高的准确率,转换后的校对工作非常简单,可以得到我们需求来提高效率。
操作步骤如下:
第一步:找将一个你将要转换的视频,复制地址链接。
第二步:打开神器,把你刚刚复制的地址链接粘贴到文本框。
第三步:点击提取短视频文案就可以一键转写了。
八、视频文案提取软件?
视频可以用轻抖提取文案
九、视频提取文案原理?
目前提取视频文案,从原理上分为三种方法。
1.利用图片识别文字的OCR技术,提取画面中有字幕的视频。
2.利用语音转文字继续,通过识别音频输出文字。
3.少部分非内嵌字幕的MKV视频文件,可以直接提取其字幕轨道内容。
根据我之前简单的测试,简单总结一下每一种具体实现方法。
1.利用OCR提取视频字幕
目前直接可用的软件有录音吧,以及一款单独的从录音吧提取出来的软件。其实两者都一样,只不过录音吧,支持更多识别引擎,付费版效果会更好些。
十、为什么提取质粒dna?
质粒多为一些双链、环状的DNA分子,是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作,进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。
在我们的细胞实验中经常会用到质粒DNA,现在都用剂盒非常方便,而且菌体培养后,可以多管浓缩提取,提到的质粒量多,可以-20℃保存,以后用于酶切、转化等实验,可以提前跑个胶,只要不降解,就可以继续用,避免每次要用,都要培养一遍再提取一遍。
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