一、叶绿素的提取？

利用蚕沙提取叶绿素的方法。天然叶绿素的提取过程中多采用浸泡提取，多采用蚕沙浸泡的方式进行提取，由于在浸泡过程中不能对浸泡罐内部的蚕沙进行搅拌，若进行搅拌会将蚕沙打碎造成提取物 料杂质增多，甚至由于杂质含量较高而无法进行使用，现有技术对叶绿素的提取工艺采用酒精、汽油、石油醚、乙醚等单一溶剂或组合溶剂进行提取，提取设备多采用平转式罐组，该工艺存在两大缺点，一是以上溶剂或有毒害、或易燃易爆、或提取效果低、或因沸点高而导 致叶绿素破坏，二是采用平转罐组提取，溶剂流动有死角，提取效率低，原料消耗大，生产成本高。

二、用什么提取叶绿素？

1．材料与试剂：菠菜、脱脂棉等、固体碳酸钠或碳酸钙、丙酮、石油醚、蒸馏水、饱和NaCL水溶液、醋酸铜结晶、KOH-甲醇溶液等，叶绿素测量仪、叶绿素计。

2．仪器设备：载玻片、盖玻片、镊子、解剖针、解剖刀、玻璃漏斗、分液漏斗中、研钵、试管、具塞锥形瓶等等。

1、叶绿体色素的提取

• 将新鲜菠菜叶片洗净擦干，去叶柄及中脉，称取 10g 去中脉的叶片，剪碎置研钵内，加入少许固体碳酸钠或碳酸钙和 10cm3丙酮，迅速研磨成匀浆，再加 15cm 3丙酮充分研磨提取叶绿素。

• 在玻璃漏斗底部垫一小团脱脂棉，将匀浆通过脱脂棉过滤到已装有 15cm3石油醚的分液漏斗中，再用少量丙酮冲洗叶片残渣和研钵，合并滤液。

• 沿分液漏斗的壁小心加入 30cm 3蒸馏水，轻轻转动加入4 -8cm3饱和NaCL水溶液，静止几分钟待分层清楚后，弃去下面的丙酮一水层。再加入 30cm3蒸馏水，轻轻晃动分液漏斗，以洗去石油醚中残留的丙酮，弃去水层。共洗两次。将色素的石油醚提取液放入具塞锥形瓶中，置暗处或用黑纸包好备用。

三、提取叶绿素的试剂？

丙酮。

叶绿素提取的准备工作是在一个半暗的房间里，室温保持在25℃。提取步骤如下：

(1) 取1000克新鲜的绿叶，在韦氏搅切器中粉碎。

(2)将粉碎的1000克绿叶放进加有少量的碳酸钙的丙酮中(温度20℃)进行萃取，直到过滤、清洗后的叶子碎片为无色。

(3)将过滤后的丙酮提取液放到盛有1升石油醚和100ml丙酮的漏斗中，然后轻轻地旋转，同时加放蒸馏水直到分层为止。水层的大部分丙酮和水溶杂质被丢弃，只剩石油醚溶液。

(4)将石油醚溶液用蒸馏水再次净化后，用含有石油醚和0.01克草酸的200ml80%的甲醇溶液清洗5次以上，最后得到黄绿色悬浮液。

(5)用无水硫酸钠对悬浮液进行干燥，并将其渗入到3cm厚的蔗糖粉末制成柱中，然后用石油醚清洗沉淀的色素去掉类胡萝卜素，使之只含有天然的叶绿素。

(6)含有天然叶绿素的蔗糖柱分两层，绿层有4-10mm的叶绿素b层，另一蓝层为2-6mm的叶绿素a层。

(7)将位于蓝层正中的部分(约占蓝层的一半) 放入醚中，对此悬浮液进行过滤、洗提，用蒸馏水清洗，用硫酸钠干燥，再用器皿进行过滤后，得到叶绿素a。

(8)将(6)中的绿层中间部分移出，迅速放入醚中过滤、洗提，制成叶绿素b醚溶液。

四、叶绿素提取最佳方法？

有机溶剂萃取是传统提取叶绿素常用的方法，主要工艺流程包括浸提、浓缩、洗涤、干燥等，最常用的有机溶剂有石油醚、乙醇、丙酮等，这种方法操作复杂，提取速度较慢，耗时比较长，叶绿素容易受到破坏，提取的叶绿素纯度不高，而且有机溶剂成本高、毒性大，残留的溶剂还会对环境造成污染。

五、提取叶绿素的方法？

有机溶剂萃取是传统提取叶绿素常用的方法，主要工艺流程包括浸提、浓缩、洗涤、干燥等，最常用的有机溶剂有石油醚、乙醇、丙酮等，这种方法操作复杂，提取速度较慢，耗时比较长，叶绿素容易受到破坏，提取的叶绿素纯度不高，而且有机溶剂成本高、毒性大，残留的溶剂还会对环境造成污染。

2 超临界流体萃取

  有利用超临界流体萃取叶绿素的方法，其是在室温条件下利用无色、无味、无毒的CO2作为提取介质进行萃取，这种方法通过改变温度和压力就可以使溶剂在超临界CO2流体中的溶解度大幅度改变，从而为物质的提取提供了更多的可能。与传统提取方法相比，超临界流体萃取极大地简化了生产流程，提高了生产效率，而且CO2不会对环境造成污染，价格较低，可以循环使用，大大降低了生产成本。

3 超声波提取

 超声波提取是近来应用越来越广泛的一种方法，超声波可以破碎细胞壁，加速细胞内物质的释放，缩短提取时间。例如有研究使用超声波提取叶绿素，在短时间内获得了大量的叶绿素，并且发现超声波时间为15 min时叶绿素含量最高。还有将振荡提取、超声波提取、振荡结合超声波提取三种方式进行比较，发现两种方式联合起来提取的叶绿素含量最高。

六、叶绿素提取的主要步骤？

1、叶绿体色素的提取

•将奇怪菠菜叶片洗净擦干，去叶柄及中脉，称取10g去中脉的叶片，剪碎置研钵内，参加少量固体碳酸钠或者碳酸钙以及10cm3丙酮，敏捷研磨成匀浆，再加15cm3丙酮充实研磨提取叶绿素。

•在玻璃漏斗底部垫一小团脱脂棉，将匀浆通过脱脂棉过滤到已经装有15cm3石油醚的分液漏斗中，再用少许丙酮冲刷叶片残渣以及研钵，归并滤液。

•沿分液漏斗的壁警惕参加30cm3蒸馏水，轻轻滚动参加4-8cm3饱和NaCL水溶液，静止几分钟待分层清晰后，弃去下面的丙酮一水层。再参加30cm3蒸馏水，轻轻摆荡分液漏斗，以洗去石油醚中残留的丙酮，弃去水层。共洗两次。将色素的石油醚提取液放入具塞锥形瓶中，置暗处或用黑纸包好备用。

2、叶绿素理化性子的视察

•光对叶绿素的损坏作用，在2支具塞试管中各放入2cm3上述色素石油醚提取液，盖好塞子。一支试管置暗处，一支试管置强光(如太阳光)下，经2—3h后，掏出2支试管视察溶液颜色有没有变革，或者在分光光度计上测定663nm处吸光度值后举行对比。

•叶绿素的荧光，取2cm3上述色素的石油醚提取液放入一支小试管中，可在窗口与入射光相垂直的偏向视察叶绿素暗红色的荧光。

•叶绿素的皂化反映，取1-2cm3上述色素的石油醚提取液一试管中，逐渐参加2-5cm3新配制的30%3KOH-甲醇溶液，使劲振动试管后静止分层，视察上基层溶液的变革。

•去镁叶绿素的形成，取1-2cm3上述石油醚提取液放入试管中，警惕参加3cm36moldm3HCL，动摇后静止分层视察溶液颜色变革。

•铜的代替作用，取1-2cm3色素的丙酮提取液于试管中，参加3cm36moldm3HCL，动摇试管，再逐渐参加醋酸铜结晶(把试管放进水浴中微微加热)，可视察到溶液的颜色由褐色酿成鲜亮绿色，阐明铜代替了氢占领在镁在叶绿素中的位置。

七、如何用丙酮提取叶绿素？

首先将干净叶片剪碎，称量，放入试管等，在向其中加入丙酮。用量0.04g叶片，5ml85%丙酮。再暗处理24小时。

八、无水乙醇提取叶绿素原理？

无水乙醇指的是纯乙醇，里面不含水或其他物质。

实验原理：

剪碎叶片并加入二氧化硅研磨：破坏叶表皮、细胞壁、细胞膜、液泡膜，使研磨充分。

用无水乙醇提取色素：叶绿体中的色素都能够溶解于有机溶剂如无水乙醇。

加入碳酸钙：防止色素被破坏。

色素在滤纸上分离开的原因：绿叶中的各种色素都能溶解于层析液中，但在层析液中的溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得快，反之则慢。这样，各种色素会随层析液在滤纸上的扩散，因扩散速度不同而分离开。

九、叶绿素提取和分离流程？

实验原理：叶绿体中的色素溶解于有机溶剂，如酒精或丙酮（相似相溶），根据此原理可以将叶绿体中的色素提取出来，形成色素液。四种色素在层析液中的溶解度不同，因而随层析液在滤纸上扩散的速度不同，溶解度越高，扩散速度越快，溶解度越低，扩散速度越慢。根据此原理使各种色素分离开来。

实验步骤：

1. 提取绿叶中的色素：

取材：称取2g菠菜叶片。

剪碎绿叶：将称好的叶片剪碎后放入研钵中。

研磨：加入少许石英砂（二氧化硅）和碳酸钙以及5ml丙酮，迅速研磨。再用5ml丙酮淋洗。

过滤：将研磨液过滤到试管中，并及时用棉塞塞紧试管口

2. 制备滤纸条：准备好长6cm、宽1cm的干燥滤纸条，剪去一端的两角，在距离该端大约1cm处用铅笔画一条细线

3. 画滤液细线：用毛细吸管吸取少量研磨滤液，沿铅笔画的线画一条细而直的滤液细线，吹干后再重复画滤液细线若干次，每次画线都要吹干后再画。

4. 分离色素：将画好滤液细线的滤纸条轻轻地插入盛有3ml层析液（如由航空汽油和丙酮按10:1的比例配制而成）烧杯中，并覆盖烧杯。滤液细线不能触及层析液。

5. 观察结果：注意观察滤纸条上有什么变化，几分钟以后，取出滤纸条仔细观察。

十、提取叶绿素层析液的配制？

层析液是由20份石油醚、1份苯、2份丙酮(注意是体积比例)配制而成的混合有机溶剂。

其中石油醚，苯，丙酮都为易挥发的物质且有一定毒性，需要在通风良好的场所配置。

在高中生物“叶绿素提取和分离”实验中，层析液是用于分离叶绿体中的不同色素的。

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