一、质粒DNA提取和细胞基因组DNA提取的异同？

质粒小，复性容易， 而染色体DNA大 ，不易复性；这导致两种DNA提取采用完全不同的策略。

质粒dna提取，为了区分于DNA，都采用首先从混合物中分离出来，然后逐步纯化；而染色体DNA提取的策略则为逐步去除其他杂质，最后剩下的就是DNA了。质粒DNA提取方法有几种，最常见的碱裂解法利用碱变形（加溶液II）后用醋酸溶液快速复性（溶液III），这样使得质粒DNA可以复性而溶解，而GenomeDNA不能复性而沉淀，从而将他们分开。

而后面的纯化如除蛋白（酚 、氯仿），除盐（75%酒精），沉淀（酒精、异丙醇等）两者类似。当然两者都有很粗略的简易提法，那就完全大相径庭啦。

二、提取基因组dna的方法有哪些？

DNA提取主要是CTAB方法，其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。

三、动物基因组dna提取运用什么方法？

组织DNA这种，因为提取方式（高速离心）和跑胶（高电压）的原因，极易产生机械损伤，而出现各种小片段，具体在胶上表现为各种拖尾如果只是做普通PCR鉴定基因型之类，这种拖尾现象其实无大碍；如果对提取产物要求高，可用试剂盒除掉小片段另外组织DNA往往都是非常大的片段（基因组），跑胶加marker我觉得没啥意思——一般我拿组织DNA提取产物去跑胶，就是看看有没有提出东西来本人以前跑的组织DNA提取产物，3μL样+2μL lording buffer，1%琼脂糖，150v，15min

四、如何提取大肠杆菌中的基因组DNA？

利用基因工程技术可以将外源基因转入大肠杆菌中。过程：

第一步：用限制性核酸内切酶（简称内切酶）切割所需要的外源基因（也称为目的基因），并提取出来。

第二步：将大肠杆菌里的质粒提取出来，并用内切酶切割出切割点，随后将目的基因+DNA连接酶连接上去（就像你缝衣服一样）。

第三步：把质粒导入大肠杆菌中，并在一段时间过后随机提取出质粒检测，看外源基因是否已经开始在大肠杆菌中复制我记得不是太清楚，详情请见高中生物选修 ——现代生物基因技术

五、动物组织提取基因组DNA的步骤和试剂？

一、实验原理

真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基因组 DNA。真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。

蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸二钠）存在下保持很高的活性。在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分离，EDTA则抑制细胞中Dnase的活性；而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA分子完整地分离出来。

二、仪器及试剂

1. 仪器：

恒温水浴锅、台式离心机、紫外分光光度计（GeneQuant）、移液器、玻璃匀浆器、离心管（灭菌）、吸头（灭菌）

2. 试剂：

（1）细胞裂解缓冲液：

Tris (pH8.0) 100 mmol/L

EDTA (pH 8.0) 500 mmol/L

NaCL 20 mmol/L

SDS 10%

胰RNA酶 20ug/ml

（2）蛋白酶K：称取20mg蛋白酶k溶于1ml灭菌的双蒸水中，?C20℃备用。

（3）TE缓冲液（pH 8.0）：高压灭菌，室温贮存。

（4）酚：氯仿：异戊醇（25:24:1）、

（5）异丙醇、冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水。

三、操作步骤

1. 取新鲜或冰冻动物组织块0.1g（0.5cm3），尽量剪碎。置于玻璃匀浆器中，加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块，转入1.5ml 离心管中，加入蛋白酶K （500ug/ml）20μl，混匀。在65℃恒温水浴锅中水浴30min，也可转入37℃水浴12～24h，间歇振荡离心管数次。于台式离心机以12000 rpm离心5min，取上清液入另一离心管中。

2.加2倍体积异丙醇，倒转混匀后，可以看见丝状物，用100ul 吸头挑出，凉干，用200ul TE 重新溶解。（可进行PCR反应等，需要进一步纯化的按下列步骤进行）

3.加等量的酚：氯仿：异戊醇振荡混匀，离心12000 rpm，5min。

4.取上层溶液至另一管，加入等体积的氯仿?异戊醇，振荡混匀，离心12000 rpm，5min。

5. 取上层溶液至另一管，加入1/2体积的7.5mol/L乙酸氨加入2倍体积的无水乙醇，混匀后室温沉淀2min ，离心12000 rpm ,10min。

6.小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将附于管壁的残余液滴除掉。

7.用1ml 70%乙醇洗涤沉淀物1次，离心12000 rpm ， 5min。

8.小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将附于管壁的残余液滴除掉，室温干燥。

9.加200ul TE重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?C20℃保存备用。

10.吸取适量样品于GeneQuant上检测浓度和纯度。

四、常见问题

1.选择的实验材料要新鲜，处理时间不易过长。

2.在加入细胞裂解缓冲液前，细胞必须均匀分散，以减少DNA团块形成。

3. 提取的DNA不易溶解：不纯，含杂质较多；加溶解液太少使浓度过大。沉淀物太干燥，也将使溶解变得很困难。

4. 电泳检测时DNA成涂布状：操作不慎；污染核酸酶等。

5.分光光度分析DNA的A280/A260小于1.8；不纯，含有蛋白质等杂质。在这种情况下，应加入SDS至终浓度为0.5%，并重复步骤2～8。

6.酚/氯仿/异戊醇抽提后，其上清液太黏不易吸取：含高浓度的DNA，可加大抽提前缓冲液的量或减少所取组织的量。

六、如何评价基因组dna提取的成功与否与质量？

由于遗传基因的差异，不同个体对一些疾病具有不同的敏感性，对同一药物的药效和不良反应也存在差异，然而这些都与DNA的多态性密不可分。

七、怎么判断提取的RNA有没有基因组DNA污染？

260/280的比值可以判断比较严重的基因组污染。也可以通过跑琼脂糖胶看加样孔里亮不亮作为一个参考依据。其实一般很难保证RNA没有基因组污染的，特别是加入氯仿后的剧烈震荡会促进dna溶解到水相里，后面就很难分离了。有些许的基因组污染的样品也能够满足大部分的实验要求。

所以在rt-pcr等试验中才要求设计的引物要跨intron，这样就可以区分扩增产物的模板来自于mRNA还是基因组dna

八、质粒dna的提取与基因组dna的提取在原理和方法方面有何异同？

　　质粒DNA提取一般用沸水浴法和碱裂解法，现在一般都采用碱裂解法，并有试剂盒可用。它主要是将细胞内的环状质粒提取出来，一般需要用SDS裂解，RNA酶降解，然后过柱，再进行洗脱.过程比较简单。　　而基因组DNA提取则较为复杂，也需要用SDS裂解和RND酶降解，但降解时间较长，同时对有些革兰氏阳性细菌还要进行溶菌酶处理，最后用氯仿-苯酚进行除蛋白，这一步重复进行多次，在用氯仿除去多余的苯酚，用乙醇清洗烘干后溶于TE缓冲液中。整个过程比提质粒更复杂，耗时也更长。

九、什么是基因组DNA？

DNA一般指脱氧核糖核酸。脱氧核糖核酸是分子结构复杂的有机化合物。作为染色体的一个成分而存在于细胞核内。功能为储藏遗传信息。

DNA分子巨大，由核苷酸组成。核苷酸的含氮碱基为腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶及胸腺嘧啶；戊糖为脱氧核糖。

DNA的结构：由一对多核苷酸链围绕一个共同的中心轴盘绕构成。糖-磷酸链在螺旋形结构的外面，碱基朝向里面。两条多核苷酸链通过碱基间的氢键相连，形成相当稳定的组合。

十、植物基因组DNA和其他生物基因组DNA有何异同？

植物基因组DNA提取与其他生物基因组DNA提取有何主要的异同 质粒DNA提取一般用沸水浴法和碱裂解法,现在一般都采用碱裂解法,并有试剂盒可用,它主要是将细胞内的环状质粒提取出来,一般需要用SDS裂解,RNA酶降解,然后过柱,再进行洗脱.过程比较简单. 而基因组DNA提取则较为复杂,也需要用SDS裂解和RND酶降解,但降解时间较长,同时对有些革兰氏阳性细菌还要进行溶菌酶处理,最后用氯仿-苯酚进行除蛋白,这一步重复进行多次,在用氯仿除去多余的苯酚,用乙醇清洗烘干后溶于TE缓冲液中,整个过程比提质粒更复杂,耗时也更多.

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